P3 laboratuvar virüsü algılama sürecini aydınlatmak
China Youth Daily müşterisi, Guangzhou, 10 Mart (China Youth Daily ve China Youth Daily muhabiri Lin Jie) "Laboratuvarın tamamı tamamen mühürlendi ve virüsle sıfır mesafeli teması var. Oda negatif baskı altında. İnsan akışı, lojistik ve hava akışı İçerideki kirleticilerin dışarıya sızmamasını ve kirliliğe neden olmamasını sağlamak için. Bugün, Guangdong Eyaleti İkinci Halk Hastanesi P3 laboratuvarının yöneticisi Lin Jianguo, P3 laboratuvarında her gün 400'den fazla yeni koroner pnömoni nükleik asit testinin yapıldığını ortaya koydu. Deneyciler, virüsleri günde 24 saat tespit etmek için moleküler biyoloji tekniklerini kullanırlar.
Nükleik asit testi, yeni koroner pnömoninin teşhisi için "altın standarttır" ve test sürecindeki her bağlantı hassas bir iştir.
Üç seviyeli bir biyogüvenlik koruma laboratuvarı olan P3 laboratuvarı, mikroorganizmaların zarar derecelerine ve toksinlerine göre dört seviyeye ayrılmıştır. Seviye 1 en düşük ve seviye 4 en yüksek seviyedir.
Bunlardan birinci seviye, sağlıklı yetişkinler üzerinde patojenik etkisi olmayan mikroorganizmalar için uygundur; ikinci seviye, insanlara ve çevreye orta derecede zarar verme potansiyeline sahip mikroorganizmalar için uygundur; üçüncü seviye, çoğunlukla solunum yollarıyla insanlara bulaşan ciddi ve hatta ölümcül hastalıklar için uygundur. Patojenik mikroorganizmalar veya toksinleri; Seviye 4, insan vücudu için oldukça tehlikeli olan, aerosollerle bulaşan veya bilinmeyen patojenik mikroorganizmalara veya bunların toksinlerine uygulanabilir ve etkili bir aşı veya tedavi yöntemi yoktur.
Operasyon sırasında, deneyci önündeki örneğe bakar ve "tek tek açması, örnek yükleme ve nükleik asit ekstraksiyonu için kapağı açması" gerekir. Bu "virüs" ile kafa kafaya bir yüzleşme.
Lin Jianguo, laboratuvardaki test sürecinin 5 adıma bölünebileceğini söyledi: örnek, "transfer penceresi" -inaktivasyon işlemi-açık kapak numunesine ve çekirdek ekstraksiyon-amplifikasyon reaksiyon karar sonucu-otoklav'a girer.
Boğaz swabları veya anal swablar gibi toplanan test örnekleri, P3 laboratuvarına girmeden önce özel bir pencereye girmelidir.Bu transfer penceresinin, örnek aktarılırken içeri giren havanın izole edilmesini sağlamak için aynı anda açılamayan çift kapısı vardır. Çift kapı laboratuar dışındaki ortamı kirletmez.
Örnek, 56 ° C'lik yüksek sıcaklıkta bir su banyosunda yarım saat süreyle inaktive edilir. Bu, virüs proteininin artık fizyolojik aktiviteye sahip olmamasına ve enfeksiyon kapma, hastalığa neden olma ve üreme yeteneğini kaybetmesine neden olur. Numuneyi test ederken nispeten güvenlidir, ancak virüs proteininin genetik dizisi Etkilenmemiş.
Guangdong Eyaleti İkinci Halk Hastanesinin Laboratuar Tıbbı Bölümü baş teknisyen yardımcısı Hu Liangshan'a göre, deneyci inaktive edilmiş numuneyi aldığında, ilk eylem sallamak, çubuk üzerindeki virüsün orta solüsyonda ayrıştırılmasına izin vermek. Ortada çökelme için 5 dakika bekletin.
Bir sonraki adım, kapağı açmak ve manuel olarak çalıştırılması gereken ve iki kişi arasında yüksek derecede işbirliği gerektiren numuneyi eklemektir.Bir kişi numune tankının kapağını açar ve diğer kişi bir mikropipet alarak numune tankından az miktarda solüsyon çekip başka bir ekstraksiyon tüpüne koyar. Burada, bir numune bir ekstraksiyon tüpüne karşılık gelir ve ardından tüp kapağını vidalayın.
Bu şekilde, deneyci ve virüs yüz yüze "yırtılma" ile her seferinde 400'den fazla numunenin 400'den fazla kez açılıp aktarılması gerekiyordu.
"Numune açılıp aktarıldığında, virüs laboratuvarda havaya maruz kalması çok kolay ve bizimle neredeyse sıfır mesafeli temas halindedir." Hu Liangshan, kapağı açıp numuneler eklerken mikropipeti tutan el sık sık Çift eldiven giydiğim için biraz beceriksizdim ama dikkatli olmak zorundaydım.Gözbağı, yüz ekranı ve biyolojik güvenlik dolabının cam penceresinin üçlü bariyeri ile tüm hareketler yavaşladı ve hareketlerin yavaşlığından dolayı zaman zaman eller titriyordu. , Genellikle sol el örnek eklemeyi tamamlamak için sağ elini tutmaktadır.
Yapay nükleik asit ekstraksiyonunun adımları daha karmaşıktır ve test, deneycilerin sabrı ve ihtiyatıdır. "Nükleik asit ekstraksiyonu aletlerle desteklenebilir, ancak karşılaştırma ihtiyacından dolayı genellikle manuel işlemler gerekir. Bu, tekrarlanan santrifüj, reaktiflerin eklenmesi, yıkama ve 10'dan fazla adım gerektirir. Bunların arasında, tüp kapağını açma işlemi 7 defadan fazladır. Yapay bir nükleik asit ekstraksiyonu yaklaşık 50 dakika sürer. "Hu Liangshan dedi.
Çıkarılan nükleik asit, nükleik asit test odasına gönderilir ve cihaz kurulmak üzeredir. Ekstrakte edilen nükleik asit amplifikasyon reaktifine eklenir ve RT-PCR reaksiyonu bir floresan PCR makinesi tarafından gerçekleştirilir. Ekstrakte edilen nükleik asit önce DNA'ya ters transkripsiyona tabi tutulur ve daha sonra DNA, spesifik bölgeleri amplifiye etmek ve denatürasyon için farklı sıcaklıklar kullanmak için bir şablon olarak kullanılır. , Tavlama ve uzama Her döngüde floresans değerleri toplanır ve floresan eğrisi 45 döngüden sonra çizilir Yaklaşık 110 dakika sürer Deneyci, floresans eğrisi analizine göre sonucun negatif mi yoksa pozitif mi olduğuna karar verir.
Lin Jianguo, herhangi bir bağlantıdaki herhangi bir sorunun "yanlış negatiflere" veya "yanlış pozitiflere" yol açabileceğini söyledi. Tespit işlemi sırasında, şüpheli numuneler için deneyci, incelemek ve onaylamak için farklı reaktifler seçecektir; ikinci olarak, her deney grubu için, rastgele olarak 3'ten fazla boş kontrol yerleştirilecek ve pozitif numuneler dizilenecek ve virüs genleri ile karşılaştırılacaktır. "Yanlış pozitiflerin" oluşmasını önlemek için. Testten sonra test edilen numuneler rastgele seçilip test edilmek üzere üçüncü taraf bir laboratuvara gönderilecek, veriler karşılaştırılıp analiz edilecek, aynı zamanda testin doğruluğunu sağlamak için ilgili departmanların dış kalite değerlendirmesine de katılacaklar.
Lin Jianguo, P3 test ekibinin şu anda 21 kişiden oluştuğunu, bunların% 70'i yüksek lisans derecesine sahip, hepsi moleküler biyoloji eğitimi almış ve PCR sertifikasına sahip olduğunu açıkladı. Şimdiye kadar, P3 laboratuvarında biyogüvenlik sorunu olmamıştır ve tabii ki bu aynı zamanda olağan eğitimle de ilgilidir.
Lin Jianguo, "Koğuşta savaşan tıbbi personelden farklılar. Laboratuvarda saklanıyorlar ve her gün virüsle yakın temasta bulunuyorlar. Başkaları için görünmeyen 'ön saflar." Dedi.
(Guangdong Eyaleti İkinci Halk Hastanesi tarafından sağlanmıştır)
Kaynak: China Youth Daily Client
